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蛋白纯化系统日常维护那些事
2025-07-01 09:54
近日，“老祖宗的教诲”系列火出了圈，早先传统文化里输出的浅显易懂且实用的道理，多少年鲜有人留意和倾听。而今，借助AI技术“复活”老祖宗来重新复述和讲解，听上去确实有一番道理，有种温故而知新的感觉。
仪器维护之道，亦如先贤智慧，贵在知行合一。实验室小伙伴们是不是通常会忽略一些简单却关键的注意事项？纵使使用手册事无巨细，若使用者未给予足够重视，或交接时疏于详尽沟通，久而久之，仪器的损耗便如暗流积聚，终有一日彻底“抱恙”——实验停滞、项目受阻，更需承担高昂的维修代价，届时追悔莫及。
这里就以英赛斯公司AutoPure蛋白纯化系统为例，简要叙述仪器的日常维护和启停注意事项（其它品牌蛋白纯化系统亦可借鉴），愿诸君防患于未然，使仪器历久弥新。
1. 日常维护
● 每天
整机流路部分
◇ 清洁擦拭外表，防止溶液结晶盐腐蚀设备外表面以及元器件；
（Ps:一些严重的仪器外观腐蚀生锈，往往从日常溅液滞留开始的。)
◇ 溶液和样品需过膜，推荐使用孔径0.45μm或相当的滤膜过滤，此操作可有效防止流路堵塞、层析柱填料及检测器脏污损坏。
◇ 检查系统管路和接头是否存在破损，特别注意Peek管是否有压折（内径大的peek管更易弯折，如1mm白管）；防止渗漏，超压，样品损失，层析柱损坏。
◇ 系统使用完毕后，需用纯水将系统冲洗干净至各基线平稳，随后使用20%乙醇清洗系并保存所有流路，防止流路长菌及性能下降。在使用含盐缓冲液和20%乙醇保存液中间需间隔纯水的冲洗，防止混合产生的微气泡滞留系统。
pH计
◇ 使用前校正pH计（一定要先校正接近7的点）
◇ 使用后将pH计拆下，使用纯水冲洗并擦拭干净，浸入保护液（pH4.0饱和KCl溶液）保存
◇ pH 电极前端由一个薄玻璃膜组成，避免磕碰、污染或干燥，否则会导致电极损坏。
pH Meter
系统泵
◇ 每次使用前或更换缓冲液时，需从排空阀排出泵腔和管路里残留的气泡（使用大注射器缓慢抽出至少5ml液体），否则会影响流速的准确性，甚至导致泵无法正常出液。
● 每周
整机流路部分
◇ 缓冲液入口滤网的检查和清洁，如果脏污较明显，可拆下滤网进行超声清洗。
◇ 检查泵后润洗液，确认是否存在显著增加或减少，同时观察是否浑浊，如有异常，需更换润洗试剂（20%乙醇），并重新做好液位标记。
● 每月
整机部分
◇ 使用1M NaOH溶液，AB泵各50%，以系统最大流速的10%冲洗约20分钟，随后立即用纯水将NaOH冲洗干净（电导值趋向于0）。
◇ 使用75%乙醇溶液，AB泵各50%，以系统最大流速的10%冲洗约2分钟，随后用纯水将乙醇溶液冲洗干净。
◇ 在线滤膜拆卸后用0.5M NaOH超声清洗10分钟。
背压阀
◇ 通过在线/拆除对比的方式，检查背压阀压力参数（5ml/min流速下0.14MPa±0.05MPa），如有高于设置值情况，可超声清洗、调节或者更换。如有疑问，建议咨询当地售后工程师。
● 每半年
压力检测器
◇ 零点检查：断开压力传感器前端及后端接头，检查显示的压力数值，如果不在零点且误差超过±0.02MPa，联系售后工程师进行上门校准。
紫外检测器
◇使用注射器将10%的表面活性剂（如Decon90 , SDS等）注入紫外流动池，来回抽吸若干次，停留20分钟后，用纯水冲洗干净。
◇使用注射器注入乙醇或1M NaOH注入紫外流动池，来回抽吸若干次，停留20分钟后，用纯水冲洗。
pH/电导检测器
◇清洗流通池：拆下pH电极，安装盲堵，用1M NaOH清洗pH流通池30分钟，然后用纯水冲洗。
◇清洗pH电极（响应慢，频发不准确时)：
1. 盐沉积：0.1M HCl/ 0.1M NaOH/ 0.1M HCl交替洗数次，间隔5分钟，中间使用水清洗电极；
2. 油脂沉积：1%SDS清洗后进行水洗；
3. 蛋白沉积：1%蛋白酶于0.1M HCl 溶液中清洗后进行水洗。
● 预防性保养
-
对整个系统做一次全面细致的维护
-
降低故障风险，提高仪器性能
-
延长仪器使用寿命
-
保养间隔：每年
2. 长时间停机注意事项
● 对于室温实验室环境的设备：
◇ 进行整机表面擦拭清洁，尤其是盐渍。
◇ 使用1M NaOH溶液，AB泵各50%，以系统最大流速的10%冲洗约20分钟，随后立即使用纯水将NaOH冲洗干净（电导值趋向于0）。
◇ 使用75%乙醇溶液，AB泵各50%，以系统最大流速的10%冲洗约20分钟，随后使用纯水将乙醇溶液冲洗干净。
◇ 使用20%乙醇溶液，执行systemwash或手动命令方式填满系统流路；同时使用封口膜将试剂瓶封口；
◇ 保持仪器开机状态，控制层析柜阶梯式升温，逐渐将层析柜温度升至室温（该过程至少需要30分钟，期间除湿功能一直开启），打开层析柜门，使柜内与外界空气流动，确保温湿度一致，随后断电，设备取出（如果层析柜要继续低温使用）或继续放在关机的层析柜中，整机遮盖防灰。
● 对于层析柜低温环境的设备：
进行整机表面擦拭清洁，尤其是盐渍。
◇ 使用1M NaOH溶液，AB泵各50%，以系统最大流速的10%冲洗约20分钟，随后立即使用纯水将NaOH冲洗干净（电导值趋向于0）。
◇ 使用75%乙醇溶液，AB泵各50%，以系统最大流速的10%冲洗约20分钟，随后使用纯水将乙醇溶液冲洗干净。
◇ 使用20%乙醇溶液，执行systemwash或手动命令方式填满系统流路；同时使用封口膜将试剂瓶封口；
◇ 保持仪器开机状态，控制层析柜阶梯式升温，逐渐将层析柜温度升至室温（该过程至少需要30分钟，期间除湿功能一直开启），打开层析柜门，使柜内与外界空气流动，确保温湿度一致，随后断电，设备取出（如果层析柜要继续低温使用）或继续放在关机的层析柜中，整机遮盖防灰。
3. 蛋白纯化系统常见故障原因分析和解决方案
①系统超压：
1）通过分段断开的方式监视压力变化，逐一排查系统堵塞点，优先检查在线滤膜、背压阀等易堵组件；若发现在线滤膜堵塞，可采用超声清洗方式处理。若清洗无效，则需要更换滤膜；
2）若背压阀堵塞，可将阀整体进行超声清洗。若清洗无效，则可以联系设备售后上门拆卸清理或整体更换；
3）若其它组件检测到堵塞，可根据实际情况拆卸清理或者直接更换。
4）使用层析柱时注意检查柱下端滤膜，因柱筛网破损泄漏填料导致系统堵塞也时有发生。
②流速脉冲/不准确：
1）进行柱塞泵问题排查与处理，先检查入口流路是否存在走空现象。若发现走空，通过排空阀抽液填充泵腔；断开双边泵头上的接头，观察出液情况，若发现一边不出液，需拆卸上下单向阀并超声清洗。若上述操作都未能解决，则需要进一步拆卸泵头，检查内部柱塞杆和凸轮运转情况；
2）进行阻尼器问题排查与处理，阻尼器漏液或破损都可能导致脉冲或流速异常，若发现设备下方桌面有漏液，应及时联系工程师上门检查；
3）进行流路漏液问题的排查与处理，若发现流速不准确，可能是某处存在漏液，沿流路检查漏点，并及时进行处理。
③紫外波动或漂移：
1. 优先考察泵流速或脉冲问题，通过调出压力曲线，观察是否跟随UV一起波动，若波动趋势一致，则说明是泵流速或脉冲带来的问题，参考上一条；
2. UV流通池问题，脏污、杂质或微气泡，参考上文“每半年/紫外检测器”清理方法，对流动池进行清洗；
3. 温度或湿度波动及异常震动：由设备所处环境的造成影响，例如置于层析柜的系统，层析柜控稳控湿出现问题，波动较大，同样会造成紫外的异常波动或漂移，此时需检修层析柜，去除干扰；同样，纯化系统周边的其它设备，如离心机，振荡器，层析柜压缩机等，带来的震动也会造成紫外波动，需排查，必要时改变系统位置，避开震动源。
4. 供电或静电因素：系统供电电源的问题（如电压不稳、地线失灵）可能会导致紫外波动，需检查设备供电是否正常，电压应在220-240VAC，无电浪涌，地线正常，零地电压≤2V。
5）光纤或紫外模块损坏：在日常设备操作或搬迁时，紫外流通池突起区域的碰撞或震动，会造成光纤头部的损坏，1.2两种原因排除后，若问题尚未解决，则为光纤损坏的可能性较大，此时需联系官方售后人员上门检查处理。
④收集体积不准确：
1）优先考察是否为泵流速不准确或脉冲问题，处理办法详见第②条；
2）收集器滴头不准，液体溅出，可观察收集过程是否有这种情况，若有则重新调整滴头管，校准收集器；
3）其它原因，如切换电磁阀或收集器控制板原因，如果确认没有上述两条问题，则需报修由原厂工程师检查电磁阀和控制板，必要时进行更换。
以上内容仅供参考，旨在帮助各位纯化小伙伴们确保设备能够常用常新，保持性能稳定，从而更好地助力实验，请对日常保养留个心，同时在出现问题时也不必慌张。大多数常见问题并非由设备故障引起，而是通过仔细排查和思考来解决的。很多时候，无需等待工程师到场，大家完全可以自己解决问题。
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