2020年mRNA疫苗的成功，让核酸药物成为整个制药行业炙手可热的赛道。也让同属于核酸药物的小核酸药物引起了广泛关注。其实早在1998年，就已经有小核酸药物上市。至今共15款小核酸药物获得FDA批准（其中2款ASO药物和1款适配体药物由于销售额过低等原因退市）。据统计，自2016年到2021年全球小核酸药物市场规模从0.1亿美元已增长至32.5亿美元，年复合增长率达217.8%。展示出巨大的增长潜力。
虽然同属于核酸药物，mRNA和小核酸药物的生产工艺大不相同。mRNA通常分子量较大，达上千nt，目前多采用以线性化质粒为模板进行体外转录（IVT）制备。而小核酸药物主要包括反义寡核苷酸 (ASO)、小干扰RNA (siRNA)、微小RNA (miRNA)、小激活RNA (saRNA)、信使RNA (mRNA)、RNA适配 (Aptamer)，一般小于100nt，通常在20-30nt，目前制备工艺仍以固相合成工艺为主。
寡核苷酸合成是一个多步连续的反应，一个循环主要包括Detritylation（脱DMT），Coupling （偶联），Oxidation（氧化，O或S），Capping（封闭）四步反应，每个循环增加一个核苷酸单体，要求反应过程中的副反应尽可能少，否则目标产品的产率就可能很低，且纯化的难度会非常大。所以每一循环的合成效率和循环数（单体数）也就直接决定了最终产品的纯度和产率。
图 1 寡核苷酸合成过程——示一个循环
比如，同样合成30个碱基的寡核苷酸，在每步合成效率为99.0%时，最终计算产率为74.72%；而如果单步收率降低至98.0%, 则最终收率会降低至55.66%。而同样单步合成效率为99.0%时，10个单体的寡核苷酸产率可达91.35%，而100个单体的寡核苷酸只能获得36.97%。所以固相合成工艺一般合成都在100个单体以内，超过60个单体已经是比较有挑战的了。
图 2 寡核苷酸单步偶联效率和最终收率计算
寡核苷酸固相合成的关键，包括所用试剂和单体的质量、合成工艺参数，也与所用设备息息相关。在核酸药物发展初期，英赛斯就敏锐的发现了相关市场对大规模核酸合成仪的需求，基于自有专利柱塞泵技术和对寡核酸合成工艺的研究，于2021年9月推出了Unique AutoOligo系列，目前产品已涵盖AutoOligo25，AutoOligo100，AutoOligo150，以及中试规模的AutoOligo600。制备量从10μmol 到50mmol。
产品上市后已广泛应用于DNA，RNA以及各种修饰寡核酸的合成，并成功应用于长达85个碱基的寡核苷酸合成。
案例分享：
案例1：21碱基甲氧氟代RNA合成，高合成效率，高纯度
序列：RNA 21碱基 甲氧氟代
目标分子量：6596.3
合成仪器：AutoOligo600
合成柱：FineLINE 35 24ml
载体信息：Nitto Phase® HL UnyLinkerTM250
合成规模：0.660mmol
单次偶联效率：99.5%
合成纯度：91.268%
图 3 21 案例1合成色谱图
图 4 案例1合成质谱
图 5 案例1 HPLC检测图谱
案例2：30碱基全硫代DNA合成
序列：DNA 30碱基 全硫代
目标分子量：9670
合成仪器：AutoOligo100
合成柱：6.3ml合成柱
载体信息：Nitto Phase® HL UnyLinkerTM 250
合成规模：0.175mmol
单次偶联效率：99.4%
纯度：85.372%
图 6 案例2合成色谱图
图 7 案例3质谱图
图 8 案例2HPLC检测图谱
案例3：85个碱基超长RNA的合成
序列：RNA 85碱基
目标分子量：23890
合成仪器：AutoOligo100
合成柱：6.3ml合成柱
载体信息：CPG，1.8g
合成规模：57μmol
单次偶联效率：97.15%
得率：8.8% （纯化后结果，高于对照合成设备10%）
图 9 案例3 一步纯化后质谱图
图 10 一步纯化后HPLC图谱